Examinando por Autor "Lorenzo Lozano, P."

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Restringido
Biofunctionalization of nylon nanofibers to be used in immunobiosensor for biological warfare agents detecting
(Formatex Research Center, 2018) Peraile, Inés; Lorenzo Lozano, P.; Murillo, N.; Maudes, J.; Rozas Sanz, Gabriel; Pérez Márquez, Ana; González López, L.; Cabria Ramos, Juan Carlos; Gil García, M.
The use of biological warfare agents involves a growing threat to society. Thus, the most countries have been forced to increase resources in research for their detection and identification. One of the critical points in the effective fight against these agents is the development of devices that allow their detection and early identification. The best choice is the immunobiosensors easy to use on-site. However, how the antibody is attached to the biosensor surface, in terms of density and orientation, will determine the diagnosis capability of the device. In this study, both a functional nanofiber able to increase the surface / volume relation, and a chemicallysimilar planar membrane were used as support for the immobilization of antibodies. Different antibody immobilization systems were carried out to biofunctionalize both surfaces: passive adsorption, covalent bond by glutaraldehyde and well-oriented immobilization by protein A/G. Our results showed that nanofibers in combination with protein A/G were a very effective immunocapture system for being used in a biosensor.
Acceso Abierto
Diseño de oligonucleótidos sonda para la detección de virus de interés en biodefensa
(Sanidad Militar, 2018) González López, L.; Peraile, Inés; Rozas Sanz, Gabriel; Cabria Ramos, Juan Carlos; Lorenzo Lozano, P.
Antecedentes: Los virus causan enfermedades en el hombre como la gripe, la rabia, la fiebre amarilla o la fiebre hemorrágica. Además, presentan características como alta variabilidad genética, virulencia y fácil transmisión y producción con infraestructuras mínimas, lo que les convierte en un problema de salud pública y de bioseguridad. Por todo ello, desarrollar sistemas de biodetección precisos y versátiles es un reto ante el cual, la tecnología de micromatrices de ADN, se presenta como un sistema de ideal. Objetivos: Diseño de oligonucleótidos sonda para la detección de especies pertenecientes a nueve familias de virus de interés en biodefensa. Material y Métodos: Se seleccionaron familias de virus de interés en biodefensa, se buscaron los genomas completos de los virus de referencia de cada una de ellas en las bases de datos (GenBank) y se identificaron fragmentos de 60 nucleótidos que cumplieran determinados condicionantes estructurales, evaluándose con BLASTN su capacidad de hibridación cruzada. Resultados: Se obtuvieron los genomas de referencia de virus pertenecientes a nueve familias. Se diseñaron un total de 54 nucleótidos sonda, seis de ellos correspondientes al virus de la gripe A tipo H1N1 y se clasificaron las secuencias según su índice de identidad, permitiendo predecir la capacidad diagnóstica de las sondas diseñadas. Conclusiones: Se han encontrado secuencias suficientes para identificar nueve familias de virus, de interés en la biodefensa, mediante la tecnología de hibridación de micromatrices de ADN.
Acceso Abierto
Label-free optical biosensing using low-cost electrospun polymeric nanofibers
(MDPI Ag, 2020-12) Martínez Pérez, P.; Ponce Alcántara, S.; Murillo, Nieves; Pérez Márquez, Ana; Maudes, J.; Peraile, Inés; González López, L.; Gil García, M.; Lorenzo Lozano, P. ; García Rupérez, J.; Generalitat Valenciana (GVA); Ministerio de Economía y Competitividad (MINECO); Unidad de Excelencia Científica María de Maeztu Centro de Astrobiología del Instituto Nacional de Técnica Aeroespacial y CSIC, MDM-2017-0737
Polymeric nanofiber matrices are promising structures to develop biosensing devices due to their easy and affordable large-scale fabrication and their high surface-to-volume ratio. In this work, the suitability of a polyamide 6 nanofiber matrix for the development of a label-free and real-time Fabry–Pérot cavity-based optical biosensor was studied. For such aim, in-flow biofunctionalization of nanofibers with antibodies, bound through a protein A/G layer, and specific biodetection of 10 µg/mL bovine serum albumin (BSA) were carried out. Both processes were successfully monitored via reflectivity measurements in real-time without labels and their reproducibility was demonstrated when different polymeric nanofiber matrices from the same electrospinning batch were employed as transducers. These results demonstrate not only the suitability of correctly biofunctionalized polyamide 6 nanofiber matrices to be employed for real-time and label-free specific biodetection purposes, but also the potential of electrospinning technique to create affordable and easy-to-fabricate at large scale optical transducers with a reproducible performance.
Restringido
lnactivation and identification of Bacillus anthracis spores
(Wageningen Academic Publishers, 2013-12) Gil García, M.; Peraile, Inés; Jiménez Pérez, M. V.; Cabria Ramos, Juan Carlos; Lorenzo Lozano, P.
Bacillus anthracis endospores must be handled ata biosafety level-3 (BSL-3} eontainment facility, therefore an appropriate inaetivation procedure is essential in order to both detect thcm in a reliable and rapid way and to avoid human infections from antrax-contamined samples if a biosafety level-3 laboratory is not availablc. Unfortunatcly, donnant spores exhibit incredible hardiness against gennicidal agents. The most effective methods for inactivating spores are usually the chemical treatment, heat inactivation (boiling, moist hcat, dry heat) and irTadiation (microwave, UV, gamma, electron beam). The inactivation method used must alter thc cell structure as little as possible in order to ensure a corree! diagnosis by diferent techniques. Several kinds ofphysical and chemical inactivation methods wcrc assessed in order to define the conditions that ensure inactivation of endospores of B. anthracis 34F2 Sterné and pcrmit, at the same time, its identification by PCR and immunoassays techniques.
Acceso Abierto
Optimización del proceso de inmovilización de anticuerpos en inmunobiosensores
(Sanidad Militar, 2018) Peraile, Inés; Gil García, M.; Guamán Collaguazo, C. E.; González López, L.; Cabria Ramos, Juan Carlos; Lorenzo Lozano, P.
Antecedentes: La detección rápida y específica de agresivos biológicos es fundamental en diversos campos como control ambiental, diagnóstico clínico, industria alimentaria, seguridad y defensa. La especificidad de la unión antígeno-anticuerpo es empleada en multitud de biosensores, como equipos de identificación de agentes de guerra biológicos, pero el cómo se una ese anticuerpo en la superficie del biosensor, en términos de densidad, orientación, y estabilidad determinará la capacidad diagnóstica del dispositivo. Objetivo: Desarrollo de procesos de inmovilización de anticuerpos en superficies planares que permitan una unión antígeno-anticuerpo eficiente, para su posterior uso en dispositivos inmunológicos de sensado. Material y Métodos: Se ensayaron tres métodos de inmovilización del anticuerpo-fluoresceína sobre una membrana Zprobe: adsorción pasiva, unión covalente con glutaraldehído (0,5 %) y unión orientada con proteína mediadora A/G (5 y 10 µg). Se seleccionó albúmina sérica bovina-ficoeritrina como simulante de toxina proteica. Resultados: El porcentaje de retención del anticuerpo inmovilizado durante el proceso de inmunocaptura fue similar en los métodos ensayados. La densidad del anticuerpo inmovilizado fue mayor en la inmovilización con glutaraldehído y menor con proteína A/G. Sin embargo, respecto a la eficiencia de la inmunocaptura del antígeno, la inmovilización del anticuerpo con glutaraldehído fue la menos eficiente frente a la inmovilización con proteínas A/G, que resultó ser la más eficaz. Conclusiones: La utilización de glutaraldehído en la inmovilización del anticuerpo, aunque incrementa la densidad de unión del mismo sobre una membrana Zprobe, interfiere en el proceso de inmunodetección antigénica, mientras que el uso de la proteína mediadora A/G permiten un sistema de inmunocaptura más eficiente, con una menor densidad de anticuerpo inmovilizado.
Acceso Abierto
Phenotypic and genetic analyses of 111 clinical and environmental O1, O139, and non-O1/O139 Vibrio cholerae strains from different geographical areas
(Cambridge University Press, 2012-08-05) Sellek Cano, Ricela; Niemcewicz, Marcin; Olsen, Jaran; Bassy Alvarez, Olga; Lorenzo Lozano, P.; Martí, L.; Roszowiak, A.; Kocik, J.; Cabria Ramos, Juan Carlos
A total of 111 clinical and environmental O1, O139 and non-O1/O139 Vibrio cholerae strains isolated between 1978 and 2008 from different geographical areas were typed using a combination of methods: antibiotic susceptibility, biochemical test, serogroup, serotype, biotype, sequences containing variable numbers of tandem repeats (VNTRs) and virulence genes ctxA and tcpA amplification. As a result of the performed typing work, the strains were organized into four clusters: cluster A1 included clinical O1 Ogawa and O139 serogroup strains (ctxA + and tcpA +); cluster A2 included clinical non-O1/O139 strains (ctxA − and tcpA −), as well as environmental O1 Inaba and non-O1/O139 strains (ctxA − and tcpA −/tcpA +); cluster B1 contained two clinical O1 strains and environmental non-O1/O139 strains (ctxA − and tcpA +/tcpA −); cluster B2 contained clinical O1 Inaba and Ogawa strains (ctxA + and tcpA +). The results of this work illustrate the advantage of combining several typing methods to discriminate between clinical and environmental V. cholerae strains.
Acceso Abierto
Protocolo para la identificación rápida y sensible de ricina en muestras ambientales ante una alerta biológica
(Sanidad Militar, 2017) Peraile, Inés; Lorenzo Lozano, P.; Gil García, M.; González López, L.; Cabria Ramos, Juan Carlos; Jiménez Pérez, M. V.
Introducción: La ricina es una toxina muy potente que ha adquirido importancia por su potencial uso como arma biológica, fundamentalmente en forma pulverulenta. El desarrollo de métodos que permitan una detección rápida y temprana tras la exposición a la toxina permitiría reducir las tasas de morbilidad y mortalidad asociadas. Ante una alerta/amenaza biológica con una muestra sospechosa de contener ricina, la Red de Laboratorios de Alerta Biológica (RELAB), infraestructura de naturaleza científico-técnica creada mediante la Orden PRE/305/2009, autoriza el envío de la muestra al Instituto Nacional de Técnica Aerospacial (INTA), uno de los laboratorios de referencia que integran esta Red. Objetivos: Desarrollo de un protocolo para la detección de ricina basado en una doble detección, un ensayo inmunológico y un análisis proteico, para aumentar la fiabilidad del diagnóstico además de acortar sensiblemente el tiempo de respuesta del laboratorio. Material y Métodos: El diagnóstico inmunológico con anticuerpos in house combinados en un ELISA tipo Sandwich. El diagnóstico proteico mediante la técnica SDS-PAGE (electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecilsulfato sódico) para determinar el tamaño y la estructura de las distintas proteínas de la muestra. Resultados: La optimización del marcado de los anticuerpos de detección así como la preparación y almacenamiento de placas previamente tapizadas/bloqueadas permite conseguir un ensayo muy sensible (<1 ng/mL) en un tiempo inferior a cuatro horas.
Restringido
Reuse of nanofibers in a Biological Warfare Agent detection nanophotonic sensing device
(CBRNE Research and Inovation, 2019-05-29) Peraile, Inés; Lorenzo Lozano, P.; González López, L.; Murillo, Nieves; Dabbagh Escalante, Nushin Alba; Rozas Sanz, Gabriel; Cabria Ramos, Juan Carlos; Gil García, M.
"The use of biological injurious agent ravages not only at human population but also at livestock and crops [1], causing effects both on human health and on the economy [2]. Therefore, the fast and specific detection of these biological injurious agents is necessary in many fields such as environmental control, clinic diagnostic, food industry, Security and Defence. Therefore, much effort has been devoted to the development of new technologies for their detection and identification. The priority objective is to carry out a low cost, easy-of-use and specific device to be used on site and able to be miniaturized [3]. In order to meet this need, the specificity of the antigen-antibody binding is applied in a multitude of biosensors. Among these immuno-biosensors, biological warfare agent detection equipment stands out. Provided both the high costs for this equipment and the need for the first responders to move into the CBRN accident area, it could be desirable to have reusable detection devices. In the OPTONANOSENS project, an immuno-biosensor with nanophotonic sensing has been developing. In this device, nylon nanofibers with 5% pyridine, manufactured by Tecnalia laid on a metallic support is used to immobilized antibodies [4,5]. The aims of this work are both to make a comparison between several procedures which let these nanofibers to be reused in different detection events and the optimisation of the more suitable procedure which allows a repetitive use and reliable of the biofunctionalized nanofibers in the final sensing device."